試著拍了常用莫爾濃度計算的說明影片，之後打算慢慢把實驗室常用技術整理放上來，然後加上影片演示說明，希望對大家有幫助，有任何建議也歡迎指教哦～ 影片連結：https://youtu.be/DLD_fUKUzEE

這是用來進行DNA熱休克轉型用的大腸桿菌勝任細胞(Competent Cell)製備方法，今天才發現原來我一直都沒有發過... 所需材料：1. 大腸桿菌 (不限於DH5α或JM109)2. Lysogeny broth (LB) agar培養盤3.

1.依目的決定啟動子a.純化蛋白質我常用的純化方式是His-tag/Ni-NTA。在蛋白質胜肽鏈之前或之後接上六個Histidine胺基酸，用來與Ni-NTA管柱裡的鎳結合，可簡單將大部分的雜蛋白質分離。通常不影響酵素活性，然複合次單元的蛋白質要考慮其結構特性，不能影響活性複合體的結合。

實驗流程與細節： 1.用RF-Cloning網站(https://www.rf-cloning.org)設計引子，並令用來合成出「含有DNA片段的載體」區域的Tm值大於攝氏59度。然後紀錄第二次PCR需要的延長時間。2.在下訂單購買長於40碼的引子時，記得一定要買PAGE純化的，以減少錯誤率。

在一般的載體構築實驗裡，這是我最喜愛的方法。因為不用像限制酶-接合酶法那樣一個一個傷腦筋地去找單一切位，然後再去翻箱倒櫃看實驗室有沒有那些限制酶存貨或為了某一個特殊的切位去買一個可能以後都用不到的限制酶。而且還可辦到那——瀟灑不留任何限制酶切位的「無痕構築(scar-less construction)」。

Plan B 單限制酶切 如果實在是經費不足，或你的基因DNA序列就是那麼地容易被各種限制酶傷害，你只找得到一種真命限制酶來切接，那就得再額外求助於蝦蝦鹼性磷酸酶 （Shrimp Alkaline Phosphatase）來處理切好的質體了！

在接合載體片段（vector)與插入片段(insert)的時候，通常都是用莫爾數比1:3（vector:insert)來調配反應比例。在20µl的接合反應裡，載體片段我會固定使用50ng，再去計算需要的插入片段質量。簡單算法為50乘以3、再乘以插入片段的bps長度、再除以載體的bps長度，即可算出需要的插入片段質量。

這個是經典到課本一定會提的DNA片段操作方法，其原理就像是剪刀（限制酶）與膠水（接合酶）一樣，只是限制酶通常只瞄準特定的DNA序列來切，所以只要我們的基因裡沒有它偏好的序列的話，就不用擔心會被錯剪了。而接合酶就真的是像膠水一樣，只要有DNA的頭（磷酸端）跟尾（羥基端）貼得很近，它就會把他們接起來！